Добро пожаловать на веб-сайт

Together — это новый информационный ресурс для всех, кого затронул детский рак: пациентов и их родителей, членов семьи и друзей.

Подробнее

Лабораторные анализы

Врачи составляют план лечения индивидуально для каждого пациента на основе конкретных, подробных данных, полученных с помощью лабораторных анализов.

Такие злокачественные заболевания крови, как лейкозы, диагностируются с помощью анализа крови и костного мозга. Другие виды рака, как правило, выявляются при анализе ткани, взятой из предполагаемой опухоли во время биопсии. Полученная для исследования ткань называется образцом.

Морфолог исследует увеличенное изображение ткани на широкоформатном мониторе.

Врачи клинической лабораторной диагностики специализируются в различных областях. Важно, чтобы исследование образцов проводил морфолог, который специализируется на определении соответствующего вида рака.

Такие исследования выполняются в морфологической лаборатории врачом клинической лабораторной диагностики, который специализируется на диагностике заболеваний методом изучения клеток, тканей и биологических жидкостей. Как и другие врачи, врачи клинической лабораторной диагностики могут специализироваться в различных областях.

  • Гематопатологи специализируются на диагностике злокачественных заболеваний крови, например лейкозов и лимфом.
  • Клинические морфологи исследуют органы и ткани тела. При диагностике онкологических заболеваний клинические морфологи специализируются на таких видах опухолей, как саркомы и карциномы.
  • Морфологи-неврологи специализируются на диагностике рака головного и спинного мозга.

Важно, чтобы исследование образцов проводил морфолог, который специализируется на определении соответствующего вида рака.

Взятие образцов

Злокачественные заболевания крови

В случае подозрения на злокачественное заболевание крови берут образец крови или костного мозга (с помощью пункции и/или биопсии костного мозга). Персонал больницы маркирует контейнер с образцом этикеткой с данными пациента, и образец отправляется в морфологическую лабораторию.

Солидные опухоли

Если возникает подозрение на опухоль головного мозга или другой части тела пациента, то возможно полное или частичное удаление опухоли хирургическим путем. Если удаляется и изучается лишь часть опухоли, такая процедура называется хирургической биопсией. При проведении других хирургических процедур удаляется максимальное количество клеток опухоли. Это называется резекцией.

Прежде чем удаленную ткань изучат под микроскопом, ее необходимо разрезать на несколько тонких пластинок, поместить на предметные стекла и окрасить с помощью специальных красителей. Существует два метода уплотнения ткани для разрезания.

  • Замораживание: ткань быстро замораживают.
  • Заливка: ткань заливается специальным воскоподобным веществом — парафином.

Все образцы ткани уплотняются с помощью заливки, однако иногда также применяется и замораживание.

При хирургической биопсии может выполняться замораживание, так что у морфолога есть возможность изучить образец биопсии во время операции. Замораживание происходит быстро, что позволяет морфологу провести анализ в лаборатории рядом с операционной. Качество образца при замораживании ниже, чем при заливке, однако это обычно не мешает морфологу быстро определить, является ли опухоль злокачественной. Полученный результат помогает хирургам немедленно принять решение о дальнейшем ходе операции.

В некоторых случаях для анализа предполагаемых солидных опухолей проводится другой вид биопсии — пункционная биопсия. При пункционной биопсии небольшой образец тканей извлекается с помощью иглы. Врач, выполняющий биопсию, помещает образец в стерильный контейнер, в который затем добавляют специальную жидкость, чтобы сохранить его. Контейнер маркируют, указывая на нем данные пациента, и отправляют в морфологическую лабораторию для анализа.

Что происходит в лаборатории

Персонал морфологической лаборатории подготавливает образец и проводит различные виды анализов, чтобы собрать данные о тканях в образце. Морфолог вносит эти сведения в заключение для онколога. Морфолог и онколог совместно ставят диагноз.

Макроскопическое исследование

Сначала морфолог осматривает образец и описывает его внешний вид при рассмотрении невооруженным взглядом. Это называется макроскопическим исследованием. Описание включает в себя цвет, размер и другие характеристики образца.

Подготовка образца

Затем персонал лаборатории подготавливает образец для изучения под микроскопом. Образец обрабатывается в специальном аппарате, который помещает ткань в парафиновый блок. Сотрудники лаборатории разрезают залитый блок ткани на тонкие пластинки (гистологические срезы) и помещают на предметные стекла. Предметное стекло — это маленькое плоское стекло, используемое для рассмотрения объектов под микроскопом.

После этого лаборант окрашивает гистологический срез с помощью красителей (обычно используются гематоксилин и эозин), которые при рассмотрении под микроскопом помогут выявить различные характеристики ткани. Ядро каждой клетки будет выглядеть синим. Оставшаяся часть клетки (цитоплазма) будет окрашена в розовый цвет.

На изображении приведен пример гистологического микропрепарата: ткани окрашены таким образом, что ядра клеток отображаются синим, а оставшаяся часть клетки — розовым.

На изображении приведен пример гистологического микропрепарата: ткань окрашена гематоксилином и эозином для выявления различных характеристик ткани при рассмотрении под микроскопом.

Микроскопическое исследование

Морфолог рассматривает гистологические срезы под микроскопом, чтобы выявить, насколько они отличаются от здоровых клеток. Такое изучение образца называется гистологическим исследованием. Гистология — это раздел науки, изучающий строение клеток и тканей.

Морфолог составляет отчет на основе увиденного под микроскопом, а также на основе проведенных анализов ткани. Отчет составляется профессиональным медицинским языком, который может быть сложен для понимания. Если у вас возникли какие-то вопросы, задайте их лечащему врачу.

Как правило, морфолог указывает следующие характеристики образца:

  • Типы клеток
  • Расположение клеток
  • Являются ли клетки раковыми
  • Другие характеристики, помогающие поставить диагноз и назначить лечение, например агрессивность клеток опухоли (часто называется степенью злокачественности опухоли) или распространение опухоли на здоровые ткани (часто называется стадией опухолевого процесса). В некоторых случаях морфологи также определяют, была ли опухоль полностью удалена или в краях образца (линия резекции) имеются опухолевые клетки.

Помимо оценки под микроскопом могут проводиться дополнительные исследования и анализы образца. Полученные результаты также будут включены в отчет о гистологическом исследовании.

При иммуногистохимическом исследовании в образце видны бласты, содержащие одновременно маркеры T-клеток, выделенные красным, и маркеры мегакариоцитов, выделенные коричневым.

Иммуногистохимическое исследование

Используют такие исследования:

Иммунофенотипирование

Иммунофенотипирование — это процесс идентификации клеток с помощью антител, который основан на типах белков (или маркеров) на поверхности клеток. Этот процесс используется для диагностики определенных видов рака путем сравнения белковых антигенов на поверхности опухолевых клеток с белками, содержащимися в здоровых клетках. Иммунофенотипирование включает иммуногистохимическое окрашивание и проточную цитометрию.

Иммуногистохимическое окрашивание

Иммуногистохимия — это метод исследования, в котором используются антитела для выявления специфических белков в образце ткани. Такой метод окрашивания помогает морфологам обнаружить аномальные клетки под микроскопом и поставить диагноз или распознать рецидив.

На диаграмме проточной цитометрии видна минимальная остаточная болезнь в виде красного скопления в правом верхнем квадранте диаграммы у ребенка с B-клеточным острым лимфобластным лейкозом

На диаграмме проточной цитометрии видна минимальная остаточная болезнь у ребенка с B-клеточным острым лимфобластным лейкозом.

Проточная цитометрия

Проточная цитометрия — это метод определения количества клеток в образце, процента живых клеток и их определенных характеристик, таких как размер, форма и наличие опухолевых маркеров на поверхности. Антитела помечают (окрашивают) светочувствительным красителем, помещают в жидкость и пропускают в потоке перед лазерным или другим световым лучом. Измерения основаны на реакции светочувствительного красителя на свет.

Данный метод анализа очень точен. За секунду может быть просмотрено несколько тысяч клеток, и может быть обнаружена даже одна злокачественная клетка среди тысяч клеток крови. Проточная цитометрия позволяет выявить опухолевые клетки, которые могут быть не видны под микроскопом. Это явление называется минимальной остаточной болезнью, сведения о ней очень важны для лечения лейкоза.

Молекулярно-генетическое тестирование

Результаты молекулярно-генетического тестирования помогают в лечении некоторых видов рака. Данный метод анализа позволяет исследовать хромосомы, гены, ДНК, РНК и белки.

Хромосомы содержат гены. Гены являются составляющими ДНК, которая содержит код для конкретных белков. Белки выполняют определенные функции клетки. Они являются основой структуры организма и необходимы для нормального функционирования.

Молекулярно-генетическое тестирование часто помогает врачу понять, насколько эффективны могут быть конкретные химиотерапевтические препараты. Изменения в генах, которые называются мутациями, могут привести к развитию рака. При некоторых видах рака мутация может вызвать увеличение количества конкретного белка в опухолевой ткани иливыработкубелка аномальной активности. Опухоли с некоторыми мутациями могут быть более агрессивными и (или) менее восприимчивыми к химиотерапии. Иногда наличие конкретной мутации может означать, что опухоль будет более восприимчивой к определенным препаратам.

Цитогенетика

Цитогенетика — это раздел науки о хромосомах. Хромосомы — это нитевидные структуры ДНКДНК являются молекулами внутри клеток, содержащими генетическую информацию, которая передается от одного поколения к другому. 

Цитогенетический анализ — это лабораторное исследование образцов ткани, крови или костного мозга для выявления изменений в хромосомах, в том числе разрывов, недостающих или лишних хромосом. Изменения в некоторых хромосомах могут быть признаком онкологического или генетического заболевания (нарушения). Цитогенетический анализ может использоваться для постановки диагноза, планирования лечения и контроля эффективности лечения.

На изображениях FISH-анализа образца показан пример перестройки гена MLL. FISH-зонд находится в местоположении гена. Если все в порядке, сигнал желтый. Если ген расщеплен, то желтый сигнал разделяется на зеленые и красные сигналы. В данном примере показано разделение, которое иногда можно наблюдать у пациентов с острым миелоидным лейкозом.

На изображениях FISH-анализа показан пример перестройки гена MLL у ребенка с острым миелоидным лейкозом. FISH-зонд находится в местоположении гена. Если все в порядке, сигнал желтый. Если ген расщеплен, то желтый сигнал разделяется на зеленые и красные сигналы.

FISH-анализ (флуоресцентная гибридизация in situ)

FISH-анализ — это лабораторный метод, который применяют для обнаружения и определения положения определенной последовательности ДНК в хромосоме. Фрагменты ДНК, содержащие флуоресцентный краситель, изготавливают в лаборатории и добавляют в клетки или ткани на предметном стекле. Когда эти фрагменты ДНК прикрепляются к определенным генам или участкам хромосом на предметном стекле, они светятся под микроскопом. С помощью FISH-анализа можно обнаружить аномалии, которые не видны при проведении обычного анализа хромосом.

Морфологи стремятся выявить аномалии, способствующие росту опухолевых клеток.

  • Слишком большое количество копий определенных онкогенов, т. е. генов, которые стимулируют рост опухолевых клеток
  • Делеция копий генов-супрессоров опухолей, т. е. генов, которые содержат информацию о предотвращении роста опухолевых клеток
  • Перестройки: часть гена отделяется и присоединяется к гену, которому не принадлежит. В результате появляется гибридный белок, вызывающий рост опухолевых клеток.
Пример амплификации фрагмента ДНК

Пример амплификации фрагмента ДНК

ПЦР (полимеразная цепная реакция)

ПЦР — это лабораторный метод, позволяющий создать множество копий определенного участка ДНК из образца, содержащего очень малое количество этой ДНК. Иногда его называют методом молекулярного «фотокопирования». ПЦР позволяет амплифицировать (увеличить) соответствующие участки ДНК, чтобы их можно было обнаружить.

ПЦР также используют для определения мутаций генов или хромосом, которые могут помочь обнаружить и диагностироватьрак.. Этот метод также применяется для изучения фрагментов ДНК определенных бактерий, вирусов и других микроорганизмов для облегчения диагностики инфекций.

Поскольку для молекулярно-генетических исследований необходимо большое количество ДНК, изучение отдельных фрагментов ДНК становится практически невозможным без осуществления ПЦР-амплификации. С помощью ПЦР можно получить миллиард копий последовательностей всего за несколько часов.

ПЦР позволяет ученым определять мутации генов и подтверждать наличие гибридных белков, вызывающих рост опухолевых клеток.

Секвенирование ДНК

Секвенирование ДНК — это лабораторный метод, позволяющий выявить точную последовательность четырех основанийДНК,которые обозначаются буквами А, Ц, Г и Т. Секвенирование ДНК используется для обнаружения мутаций (изменений) ДНК, которые могут вызвать рак.

Секвенирование ДНК может быть широким или таргетным. Таргетное секвенирование (также называемое мультигенными панелями) позволяет изучать конкретные мутации. Некоторые виды таргетного секвенирования предполагают анализ изменений, характерных для одного вида рака. Другие его виды позволяют изучать изменения, которые встречаются при многих формах рака.

Широкое секвенирование ДНК позволяет выполнять анализ последовательностей крупных участков ДНК. Такие исследования включают в себя полное секвенирование экзома и полное секвенирование генома.

Полное секвенирование генома позволяет считывать последовательность всей ДНК клеток пациента, т. е. его геном. Полное секвенирование экзома позволяет считывать последовательность всех генов пациента, т. е. его экзом. Большинство онкологических заболеваний вызваны изменениями ДНК в генах, однако мутации ДНК вне генов также могут послужить причиной роста опухолевых клеток. 

Получение результатов

Иногда все исследования и анализы проводятся в том же медицинском центре, где выполнялась биопсия. В других случаях образец необходимо отправить в лабораторию, расположенную в другом учреждении. Некоторые исследования осуществляются в несколько этапов и включают в себя несколько процедур, поэтому на получение результатов может уйти несколько недель.

Морфолог включит сведения, полученные по результатам этих анализов, в отчет о гистологическом исследовании, который передается онкологу. Онколог сообщит результаты отчета о гистологическом исследовании на приеме в клинике.

Чем больше данных о болезни удается собрать врачам, тем лучше они могут спланировать наиболее эффективное лечение в каждом конкретном случае.


Дата изменения: июль 2018 г.